Изучена динамика Ras-зависимой сигнализации в процессе гербимицин A-индуцированной эритроидной дифференцировки клеток человека линии K562. Функциональную активность p21Ras анализировали путем прямого измерения соотношения GTP/GDP в анти-р21Ras-иммунопреципитатах клеток K562, предварительно инкубированных с <$E roman {H sub 3 nothing sup 32 PO sub 4}>. Динамику фосфорилирования клеточных белков по тирозину изучали методом Вестерн-блоттинга. Мониторинг активации Erk2 осуществляли методом сдвига электрофоретической подвижности. Фосфотирозинсодержащие белки, которые связываются с рекомбинантной GST-конъюгированной формой адаптерного белка Grb2, идентифицировали с помощью метода GST-связывания in vitro. Результаты: показано, что относительное количество GTP, ассоциированного с белком Ras, в контрольных клетках в течение 72 ч культивирования колеблется от 27 до 37 %. Гербимицин A уже на 3-й ч вызывает возрастание соотношения GTP/GDP на 15 %. В последующие исследованные периоды этот показатель падает и на 3-и сутки не достигает контрольных значений. Преходящее повышение уровня <$E roman {Ras~cdot~GTP}> на 3-м ч инкубации клеток K562 с гербимицином A коррелирует с усилением фосфорилирования по тирозину белков с молекулярными массами 210, 160, 140, 116 и 42 кДа, активацией Erk2 и усилением связывания ряда фосфотирозинсодержащих белков с GST-Grb2. Ингибирование взаимодействия стыковочного белка Shc с GST-Grb2 наблюдается на поздних стадиях индукции (48 - 72 ч), в то время как уровень связывания фосфотирозинсодержащих белков в этот период практически не отличается от контрольных значений. Вывод: полученные

данные позволяют предположить, что динамика Grb2-опосредованных белков - белковых взаимодействий может определять специфичность Ras-зависимой сигнализации в процессе эритроидной дифференцировки клеток K562, индуцированной гербимицином A.

Ключ. слова: K562, differentiation, Herbimycin A, p210Bcr-Abl, p21Ras, Grb2, Shc
Індекс рубрикатора НБУВ: Р562.1-29

Рубрики:

Рак

Шифр НБУВ: Ж14160 Пошук видання у каталогах НБУВ 

---

  Якщо, ви не знайшли інформацію про автора(ів) публікації, маєте бажання виправити або відобразити більш докладну інформацію про науковців України запрошуємо заповнити "Анкету науковця"