Розроблено ефективну технологію одержання розчинного альфа-2b інтерферону людини (ІФН) з використанням системи експресії на основі РНК-полімерази фага Т7. Синтезований для цього штучний ген ІФН клонували в експресійний вектор pET-24a, який містить Т7 промотор і термінатор. Рекомбінантну плазміду, позначену як pET-aІФН, трансформували в клітини E. coli BL (DE3) і синтез ІФН індукували ізопропіл-<$E beta>-D-тіогалактозидом. Вивчено вплив температури (37 и 21 <$E symbol Р>C ) культивування клітин Е. coli BL (pET-aІФН) на рівень синтезу та вихід розчинного ІФН. Встановлено, що рівень синтезу рекомбінантного білка у перші години після індукції за температури 37 <$E symbol Р>C вищий, ніж за 21 <$E symbol Р>C. Так, через 4 год після індукції вихід ІФН у р культивування продуцента за 37 <$E symbol Р>C складає до 20 %, а у разі 21 <$E symbol Р>C - лише 7 % від сумарних білків клітини. Однак, якщо ІФН експресується за температури 37 <$E symbol Р>C, то він накопичується в клітинах у вигляді нерозчинних тілець-включень. Показано, що зниження температури культивування продуцента після індукції сприяє накопиченню цільового білка в розчинній формі. Збільшення тривалості культивування продуцента за температури 21 <$E symbol Р>C до 18 год дозволяє одержувати розчинний ІФН у більшій кількості. Розроблено технологію одержання ІФН, яка передбачає інфікування фагом лямбда клітин E. coli BL21 (DE3), які містять плазміду з цільовим геном під контролем промотора фага Т7. В результаті лізису клітин штамма-продуцента синтезований цільовий білок вивільняється у середовище для росту, де й накопичується у розчинній формі.

За оптимальних умов культивування 1 л фаголізату містить біля 200 мг розчинного ІФН. Одержаний вихід ІФН більш ніж у 2,5 рази вищий у порівнянні з раніше досягнутим виходом розчинного ІФН у разі використання як продуцента клітин E. coli SG30 (pIF-16), що несуть плазміду з двома копіями, штучного гена ІФН під контролем тандема триптофанових промоторів.

Індекс рубрикатора НБУВ: Е303.33

Шифр НБУВ: Ж14252 Пошук видання у каталогах НБУВ 

---

Додаткова інформація про автора(ів) публікації:
(cписок формується автоматично, до списку можуть бути включені персоналії з подібними іменами або однофамільці)

• Воробей Надія Володимирівна (філологічні науки)
• Кордюм Віталій Арнольдович (1931–) (біологічні науки)

  Якщо, ви не знайшли інформацію про автора(ів) публікації, маєте бажання виправити або відобразити більш докладну інформацію про науковців України запрошуємо заповнити "Анкету науковця"