Відомо, що однією з причин хвороби Паркінсона є неправильний фолдинг і накопичення агрегатів alpha-синуклеїну. Найважливішим чинником, що впливає на процес агрегації alpha-синуклеїну, є рівень цього білка в нейронах, який залежить від балансу рівноваги між його синтезом, деградацією та секрецією. За певних умов, коли синтезується велика кількість alpha-синуклеїну, мономери цього білка можуть агрегувати на ліпідній мембрані, що призводить до утворення амілоїдів, фібрил і протофібрил, не здатних виконувати фізіологічні функції. Оскільки вивчення властивостей alpha-синуклеїну in vivo є неможливим, дослідники активно послуговуються модельними біологічними системами (одноклітинні мікроорганізми, лінії людських клітин, тваринні моделі тощо). Мета дослідження - сконструювати рекомбінантний штам S. cerevisiae з регульованою експресією людського alpha-синуклеїну для дослідження властивостей цього білка в умовах in vivo та скринінгу низькомолекулярних сполук, що впливають на його агрегацію та деградацію. Методом електротрансформації отримано рекомбінатний штам S. cerevisiae з регульованою експресією alpha-синуклеїну, кон'югованого з зеленим флуоресцентним білком. Для виявлення рівня експресії відповідного білка застосовано метод Вестерн-блотингу зі специфічними антитілами, а для доcлідження внутрішньоклітинної локалізації - метод флуоресцентної мікроскопії. Внаслідок експериментальної роботи сконструйовано рекомбінатний штам S. cerevisiae, в якого кодуюча послідовність гена alpha-синуклеїну людини експресувалася з-під регульованого промотора гена ScMET25. У ході аналізу впливу різних концентрацій екзогенного метіоніну (як фактора регуляції експресії промотора ScMET25) на вміст рекомбінантного білка у клітинах дріжджів виявлено, що експресія відповідного химерного гена у модельному штамі репресується за наявності метіоніну в концентрації 10 мг/л та вище. Під час тривалого культивування клітин дріжджів цей ефект зменшувався, ймовірно, внаслідок вичерпання метіоніну в ростовому середовищі. Встановлено, що продукція рекомбінантного alpha-синуклеїну в клітинах S. cerevisiae практично не впливала на ріст клітин хазяїна, що вказує на відсутність або незначний токсичний ефект людського alpha-синуклеїну для цього виду дріжджів. Встановлено, що регульована експресія рекомбінантного alpha-синуклеїну в клітинах дріжджів S. сerevisiae може бути використана з метою скринінгу нових сполук, здатних впливати на агрегацію чи деградацію alpha-синуклеїну в клітинах дріжджів.

 Наукова періодика України 

---

Додаткова інформація про автора(ів) публікації:
(cписок формується автоматично, до списку можуть бути включені персоналії з подібними іменами або однофамільці)

• Стасик Олег Володимирович (біологічні науки)
• Стасик Олена Георгіївна (біологічні науки)

  Якщо, ви не знайшли інформацію про автора(ів) публікації, маєте бажання виправити або відобразити більш докладну інформацію про науковців України запрошуємо заповнити "Анкету науковця"