У роботі додатково введено дріжджовий гомолог (RFEIDh) гена РФ- екскретази людини (BCRP1) для покращення сконструйованих раніше надсинтетиків РФ дріжджів Candida famata. Введення гена RFEI Dh привело до підвищення продукції РФ у 1,5 раза рекомбінантними штамами BRP/RFE1 порівняно з реципієнтним штамом BRP (Best Riboflavin Production), а також до зниження вмісту флавінів у клітинах. Отримані результати вказують, що шляхом посилення екскреції РФ можна підвищити рівень його продукції. Також сконструйовано рекомбінантні штами AF-4/prLAC4-SEFl, BRP/RFEl/prLAC4-SEFl та BRPI/prLAC4-SEFl шляхом введення гена позитивної регуляції флавіногенезу SEF1 під контролем промотора гена /?-галактозидази - LAC4, який індукується лактозою. Надекспресія гена SEF1 під контролем промотора LAC4 забезпечила 1,5 кратне збільшення продукції РФ із використанням як живильного середовища молочної сироватки. Аналіз флавіногенної активності дріжджових надсинтетиків РФ AF-4, BRP, BRPI, BRP/RFE1, BRP/RFEl/prLAC4- SEF1 та BRPI/prLAC4-SEFl також виявив здатність до високого рівня синтезу цього флавіну за використання молочної сироватки. Встановлено, що активний ріст та флавіногенез дріжджів у сироватці можливий лише при внесенні додаткового джерела Нітрогену у вигляді сечовини, амоній сульфату чи діамоній гідрофосфату (3 г/л). Крім цього, ріст спостерігається лише при низькому вмісті лактози (2-5%) у сироватці. Використання молочної сироватки як живильного середовища для мікробного синтезу РФ значно знизить собівартість виробництва РФ та забезпечить зменшення забруднення довкілля відходами молочної промисловості. Заключною частиною роботи було одержання дріжджового продуцента бактерійної антибіотичної сполуки - амінорибофлавіну (АФ). Беручи до уваги, що у Streptomyces davaonensis АФ формується із ФМН, який синтезується із РФ, нами створено продуценти АФ на основі сконструйованих раніше у нашому відділі дріжджових надсинтетиків ФМН - FP (Flavinmononucleotide Producer) С. famata. Плазміду, що містила синтетичний ген rosB. S. davaonensis із необхідними модифікаціями кодонової системи (триплет кодон CUG дріжджів кодує серин, а не лейцин, як у бактерій), було введено у штам надсинтетик ФМН FP. Аналіз флавіногенної активності одержаних рекомбінантних штамів, що містили ген rosB, дозволив виявити нову фракцію флавінів. Результати хроматографічного та мас- спектрометричного аналізів підтвердили, що дана сполука є АФ. Продукція АФ у культуральному середовищі рекомбінантів FP/RosB С. famata сягала 5 мг/л. Синтез АФ у природі здійснюється лише прокаріотичними мікроорганізмами. 19 Нами вперше отримано продукцію АФ в клітинах еукаріотичного мікроорганізму - дріжджах C.famata.

• Цирульник Андрій Олександрович (біологічні науки)

  Якщо, ви не знайшли інформацію про автора(ів) публікації, маєте бажання виправити або відобразити більш докладну інформацію про науковців України запрошуємо заповнити "Анкету науковця"